β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

(1)对硝基酚比色法：

①基质对硝基酚应纯化，配制前置50℃烘24h。用10mmol/LNaOH配成0.04mmol/L浓度，用窄带宽分光光度计扫描吸收曲线，λmax=401nm，根据IFCC标准，Aλmax=0.7316～0.7388，Eλmax=18380±90(25℃)。根据对硝基酚的摩尔吸光系数，计算NAG活性单位的公式为：

以上公式是根据IFCC的标准E值计算的，各实验室应根据具体仪器条件测定E值，建立计算式。

②底物溶解度小，配制时应先用适量pH4.6缓冲液调成糊状，再逐渐加缓冲液至所需量。

③测定结果超线性范围时，应将标本用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

④尿酶浓度受尿量影响较大，应留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值计算酶排出率，即不受尿浓缩或稀释的影响，又不需留24h尿。

(2)荧光光度法：

①荧光法测NAG已有国产试剂盒，其敏感度高，不受尿色干扰。

②也可用上海第三分析仪器厂产930荧光光度计，激发滤光片360，发射滤光片用(400+450)复合，效果满意。

③本法酶反应液中各成分浓度为：底物1.33mmol/L，枸橼酸20mmol/L，Na2HPO432mmol/L。

④配试剂所用溶剂应用重蒸馏水，底物应无游离4-MU，BSA中应无该酶或用50℃加热2h灭活。

⑤血清中NAG于4℃稳定数小时至数天，-20℃可稳定数月。尿标本4℃稳定1周，也可用枸橼酸盐抗凝血浆。

⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二种酶催化水解，一种是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.30)，另一种是β-N-乙酰已糖苷酶(EC3.2.1.52)，只有对提纯的酶才能限定EC3.2.1.30或EC3.2.1.52。目前国内文献中常称的NAG，严格地说是按所用底物命名的，而不是指酶对底物的特异性。所以目前国外文献常泛称β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。