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麝香草酸浊度试验

简介:测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。有关这方面的测定在别外章节中已有详尽讨论,本节中主要叙述一些和蛋白质代谢有关的简单血清胶体稳定试验。各种血清胶体稳定性试验的原理基本相同,但所用的试剂不同,促进和抑制絮浊的作用有差异,目前临床常用的有TTT试验。

麝香草酸浊度试验不宜人群

无。

麝香草酸浊度试验注意事项

TTT是一个很简单的试验,但各试验室间出入往往不小。造成此差异因素很多;首先是虽然同称为TTT试验,但各个实验室在试剂配制,标准曲线绘制或标准管配制方法上并不相同。

(1)国内所报告的TTT单位为Shank(襄克)单位。1944年Maclagen(麦克莱根)首先建立TTT试验,当时以Kingsley(金斯莱)尿蛋白比浊管表示TTT浊度单位(相当于10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所显示的浊度为一个Maclagan单位)。后来,Shank和Hoagland改用BaSO4悬液作为浊度标准,由0.0962mol/LBaCl2加H2SO4所产生的浊度相当于Maclagan所应用的Kingsley标准。但在发表文章

时,误印为0.0962NBaCl2,因此测定结果为麦氏单位的二倍(1个麦氏单位=2个Shank单位)。

(2)血清要新鲜,应早晨空腹抽血。用分光光度计比浊法测定麝浊时,如血内脂质较多,可用生理盐水6ml代替缓冲液稀释血清,作空白管。

(3)麝香草酚-巴比妥缓冲液的pH应在7.50~7.60。pH增高,敏感度降低,可出现假阴性;pH降低,敏感度升高,可出现假阳性。

(4)为了简化手续,不少实验室用100g/L麝香草酚乙醇溶液,直接加入巴比妥缓冲液中,省去结晶和过滤步骤,但此配方较原法多含1%乙醇,试验结果表明比原配方的浊度偏离约20%,絮状试验阳性率反而降低。

(5)麝香草酚浊度试验结果随温度的改变而有所变化。一般是温度高,浊度低;温度低,浊度高。为了克服这一误差,可以从表1上将不同温度下的浊度结果换算成25℃的结果以便于比较。

使用说明:以6u一行为例,在10℃时测定的6u,实际上在25℃时为4.7u。在30℃时测定的6u,在25℃时为7.2u。余类推。

(6)配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点:①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的,但当浓度小于0.1mol/L,形成的硫酸钡浊度低;浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此,硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度:10℃时形成的硫酸钡颗粒细,浊度较高,结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗,浊度较低,重复性不易控制。③操作手法:混和方法不同,形成的硫酸钡颗粒大小不同,结果相差很大。所以,每次按规定操作可提高精密度。

(7)麝香草酚缓冲液易变质,但如保存于冰箱中,可因结晶逐渐析出而降低敏感度,故平时使用时,仍应置室温中,如显混浊,即不能用。

(8)麝香草酚应为洁白晶体,如带黄色,须重结晶处理。可按下法重结晶精制:取麝香草酚100g,溶于100ml95%乙醇中,以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水,混匀。静置20min后吸滤,用冷蒸馏水洗结晶两次,可得到洁白的结晶,置干燥器内待完全干燥后使用。

(9)用巴比妥配制的试剂不能久置,超过2周后,TTT结果有增高趋势,一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关,因为久置后,巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液,具有稳定性高,所配TTT试剂放室温至少可保存3个月,且浊度结果受室温变化的影响小。

(10)光电比浊法与光电比色法有所不同,比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外,悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射和折射,因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外,还有折射的光,后者不是平行光束,混和液和光电池之间距离越大,则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时,比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边,可以提高准确度。

(11)麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比,要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液。

缓冲液中麝香草酚含量测定法:麝香草酚标准液(1ml含0.1mg):准确称取试剂规格麝香草酚100mg,加水溶解后加水至1L。

取待测麝香草酚缓冲液1ml,用水稀释至10ml,以后按表2进行测定。

混匀37℃水浴放置15min,750nm比色,以空白管校正吸光度至零,读取各管吸光度,按下式计算:

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